{"id":5387,"date":"2023-06-17T08:52:16","date_gmt":"2023-06-17T08:52:16","guid":{"rendered":"https:\/\/fkv.it\/strumentazionedalaboratorio\/?p=5387"},"modified":"2024-03-07T14:50:11","modified_gmt":"2024-03-07T14:50:11","slug":"analisi-azoto-totale-kjeldahl","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/fkv.it\/strumentazionedalaboratorio\/2023\/06\/17\/analisi-azoto-totale-kjeldahl\/","title":{"rendered":"Analisi dell’azoto totale Kjeldahl"},"content":{"rendered":"\n

Nella produzione di vaccini farmaceutici<\/strong>, \u00e8 necessario controllare il livello degli antigeni<\/strong> nei prodotti iniziali, intermedi e finali. Questi prodotti vengono testati per la quantit\u00e0 di virus o batteri attenuati o devitalizzati presenti. Poich\u00e9 gli antigeni sono principalmente costituiti da proteine<\/strong>, la quantificazione analitica delle proteine totali<\/strong> rappresenta il metodo preferito per valutare la presenza degli antigeni. In questo caso possono essere importanti degli strumenti per l’analisi dell’azoto totale Kjeldhal<\/strong>.<\/p>\n\n\n\n

\"\"<\/figure><\/div>\n\n\n\n

La quantificazione analitica delle proteine totali<\/h2>\n\n\n\n

La determinazione dell’azoto e delle proteine totali nei prodotti farmaceutici \u00e8 descritta nella Farmacopea Europea (Ph.Eur.) <\/strong>nella sezione 2.5.9 e nel metodo 7 della sezione 2.5.33. <\/strong>Nella Farmacopea degli Stati Uniti (USP)<\/strong>, la determinazione dell’azoto \u00e8 descritta nella sezione 461.<\/p>\n\n\n\n

Questi metodi compendiali svolgono un ruolo fondamentale nel garantire la qualit\u00e0 e la coerenza dei prodotti farmaceutici, determinando il contenuto di azoto e proteine totali<\/strong>. L’utilizzo di questi metodi analitici consente di garantire il controllo qualitativo e la coerenza dei vaccini farmaceutici, poich\u00e9 permettono di valutare in modo accurato la quantit\u00e0 di proteine totali e di conseguenza degli antigeni presenti nei prodotti.<\/p>\n\n\n\n

Determinazione dell’azoto Kjeldhal<\/h2>\n\n\n\n

Le normative delle farmacopee includono diversi metodi rilevanti per tale scopo. Tra questi, si trovano due metodi per la determinazione dell’azoto totale: il metodo Kjeldahl<\/a> e il metodo di combustione catalitica.<\/p>\n\n\n\n

Abbiamo parlato del metodo in combustione catalitica<\/strong> nel seguente articolo: Controlli di antigeni sui vaccini tramite determinazione dell\u2019Azoto Totale<\/a><\/p>\n\n\n\n

La determinazione dell\u2019azoto Kjeldhal<\/strong>, invece, si pu\u00f2 eseguire come descritto di seguito, mediante l’utilizzo degli strumenti per l’analisi dell’azoto totale Kjeldhal<\/a> di Opsis LiquidLINE<\/a>.<\/p>\n\n\n\n

KjelROC \u00e8 un sistema automatico per la determinazione dell\u2019azoto Kjeldahl<\/strong>, che permette di far fronte in modo affidabile e rapido alle esigenze analitiche del settore farmaceutico. Diversi aspetti costruttivi rendono KjelROC particolarmente innovativo; tra questi, la titolazione predittiva<\/strong> \u00e8 certamente il pi\u00f9 importante in termini di ripetibilit\u00e0, accuratezza e velocit\u00e0 di analisi.<\/p>\n\n\n\n

La titolazione predittiva<\/h3>\n\n\n\n

La titolazione predittiva \u00e8 una parte fondamentale del sistema, perch\u00e9 permette di velocizzare la titolazione senza ridurre la precisione analitica ma addirittura migliorandola<\/strong>: la buretta da 50 ml permette step di aggiunte di volumi di titolante (HCl) pari a 1.95 \u00b5l e mediante un sensore ottico \u00e8 possibile apprezzare le minime variazioni di colore per identificare il corretto punto di equivalenza. Il sensore \u00e8 posizionato sul fondo ed \u00e8 in grado di leggere tutto il volume del recipiente di titolazione.<\/p>\n\n\n\n

La titolazione predittiva utilizza algoritmi avanzati insieme a misurazioni del colore per prevedere continuamente il dosaggio richiesto dalla buretta, garantendo un LOD di 0.006 mgN e un LOQ di 0.018 mgN.<\/p>\n\n\n\n

Preparazione e Digestione<\/strong><\/h3>\n\n\n\n

Per eseguire l\u2019analisi dell\u2019azoto totale<\/strong>, i campioni devono essere preventivamente digeriti con acido solforico e l\u2019ausilio di un catalizzatore. Il campione, l’acido solforico e il catalizzatore vengono inseriti nei tubi in vetro, alloggiati in un blocco di alluminio; il volume di campione da analizzare \u00e8 normalmente funzione del range di concentrazione di azoto atteso, e deve essere scelto per ottenere un contenuto di azoto totale superiore a 0,05 mg per ottenere una buona deviazione standard. Il digestore raggiunge la temperatura di 450 \u00b0C (riscaldamento rapido da 20 \u00b0C a 450 \u00b0C in 45 minuti).<\/p>\n\n\n\n

I fumi acidi che fuoriescono dai tubi durante la digestione sono raccolti attraverso la parte superiore dei tubi nell\u2019exhaust. Un o-ring di tenuta in PTFE viene interposto tra l\u2019estremit\u00e0 superiore dei tubi e l\u2019exhaust, la cappa di aspirazione dei fumi acidi, assicurando una piccola presa d’aria e impedendo la fuoriuscita di vapori e gas dalla digestione. I gas provenienti da diversi tubi vengono raccolti dall\u2019exhaust e convogliati all\u2019esterno.<\/p>\n\n\n\n

L\u2019exhaust prevede due punti di suzione dei gas acidi <\/strong>posizionati su due lati opposti; questa specifica rende omogenea l\u2019evacuazione dei gas acidi di decomposizione e garantisce l\u2019uniformit\u00e0 di trattamento dei singoli campioni presenti nel blocco di digestione. \u00c8 importante che l’uscita dell\u2019exhaust sia collegata a un’aspirazione esterna in modo da ottenere un’aspirazione efficiente dei fumi.<\/p>\n\n\n\n

Distillazione e titolazione<\/h3>\n\n\n\n

Una volta completato il processo di digestione<\/a>, a seguito del raffreddamento, si pu\u00f2 procedere all\u2019analisi dell\u2019azoto<\/strong> mediante l’analizzatore KjelROC<\/a>, che provveder\u00e0 in maniera automatica alla distillazione e alla titolazione.<\/p>\n\n\n\n

Il tubo in vetro contenente il campione precedentemente digerito viene posizionato nell\u2019alloggiamento dell\u2019analizzatore e si seleziona il metodo di distillazione desiderato attraverso il software caricato su un terminale presente sul corpo macchina. In maniera automatica, viene introdotto il volume di acqua (70 ml) per la diluizione del campione precedentemente digerito e il volume di NaOH al 40% (50 ml) per convertire NH4+<\/sup> (solido) in NH3<\/sub> (gassoso). Quest\u2019ultima viene trasportata al titolatore colorimetrico mediante una corrente di vapore il cui flusso \u00e8 regolato tra il 10% e il 100% e in maniera automatica viene introdotta la soluzione ricevente di acido borico (30 ml) per \u201ccatturare\u201d l\u2019ammoniaca disciolta, infine titolata per via colorimetrica con HCl (0,0500 N). Il contenuto di azoto misurato<\/strong> \u00e8 dunque calcolato dalla quantit\u00e0 di ammoniaca determinata.<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"

Esistono due metodi per la determinazione dell’azoto totale: il metodo Kjeldahl e il metodo di combustione catalitica. Andiamo a vedere il primo.<\/p>\n","protected":false},"author":3,"featured_media":5388,"comment_status":"open","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":[],"categories":[439,58],"tags":[121],"yoast_head":"\nAnalisi dell'azoto totale Kjeldahl - FKV<\/title>\n<meta name=\"description\" content=\"Esistono due metodi per la determinazione dell'azoto totale: il metodo Kjeldahl e il metodo di combustione catalitica. 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